La technique de la PCR :

 

La technique dite de PCR est une technique relativement moderne et a très vite remplacée la technique RFLP. Plus rapide et moins coûteuse, elle est maintenant majoritairement utilisée en criminologie. Cette technique reproduit in vitro la réplication naturelle de l'ADN au cours de la division cellulaire et permet de répliquer une séquence d'ADN en milliers de copies.

La polymérase est une enzyme capable d'assembler des nucléotides, formant ainsi un brin d'ADN complémentaire au fragment à analyser. La technique de la PCR repose sur la découverte d’une enzyme polymérase résistant à des températures de 95° nécessaire à la dénaturation de l’ADN : la Taq polymérase.
Le principe de la PCR consiste tout d’abord à effectuer une digestion d’un fragment d’ADN par l’intermédiaire d’enzymes de restriction qui vont  encadrer la zone à amplifier sur la molécule d’ADN. On synthétise ensuite les fragments complémentaires en présence de  la Taq Polymérase. Aujourd’hui ce processus est automatisé grâce à des machines, des «cycleurs thermiques»,  permettant une régulation de la température aux différentes phases de cette technique.
Une élévation de la température aux différentes phases du processus (séparation des deux brins, hybridation des amorces, élongation par la polymérase) est apportée et permet l'accélération de la réaction.

Le cycle est répété plusieurs fois (habituellement 20 cycles ce qui représente environ 1 million de copies) dans le même tube. On obtient ainsi, à la fin de la réaction assez de copies de la séquence cible pour permettre son identification. Les fragments d'ADN  produits sont ensuite séparés en fonction de leur taille et permettent d’établir une empreinte génétique. (voir électrophorèse).

La technique de la PCR présente de nombreux avantages :

- Il ne faut qu’une très faible quantité d'ADN représentant cinquante à cent cellules, qu'il soit dégradé ou non, purifié ou non, récent ou ancien. Ceci permet d'obtenir des résultats à partir de très petits échantillons.

- La méthode est facile à pratiquer, les réactifs pouvant être fournis sous forme de kits prêts à l'emploi.

- Le recours à l'informatique permet d'obtenir le résultat de l'analyse dans un délai très court : douze heures pour une trace de sang, soixante douze heures pour une trace de sperme. Dans le cas d'un prélèvement buccal ce délai n'excède pas six heures.

La seule faiblesse de cette méthode, liée à sa très grande sensibilité, réside dans le risque de contamination par un ADN étranger, et ce d'autant plus que la quantité d'ADN analysable est réduite. Des précautions draconiennes doivent donc être observées tant au stade du recueil des échantillons qu'à celui de l'analyse.

Autre animation : "LA PCR ?" (En Français)

Pour en savoir plus : site dnalc (animation en anglais)

Voici une animation illustrant la technique de la PCR :